粪类圆线虫病三分泌物组织检查

作者：曹兴午韩呈武袁长巍

　　粪类圆线虫近期屡屡在 　　3.1痰液及分泌物的检查支气管分泌物涂片HE染色标本观察结果:可见数量较多的线虫幼虫结构,咽管呈深染其长度约占体长1P2,见图1A,虫体尾部结构显示不清,但高度疑似为粪类圆线虫丝状蚴。为进一步确认,从患者气管插管中吸取分泌物做生理盐水直接涂片镜检发现:在低倍镜下,每个视野可见5~32条不等的蠕动活跃的细长虫体,用蒸馏水涂片在室温维持1h仍见虫体活跃自如;高倍镜下,虫体细长,无鞘膜,测量15条虫体体长在~μm范围,咽管长度占体长1P2,虫体前段较粗,后段逐渐变钝,尾端钝圆,见图26A,B。在痰液涂片中均未发现成虫和虫卵。依据虫体形态,鉴定为粪类圆线虫丝状蚴[13]。

　　图26A气管分泌物中的粪类圆线虫丝状蚴(HE染色×40)[13]

　　图27B气管分泌物中的粪类圆线虫丝状蚴(活体×40)[13]

　　张峰报告[16]笔者认为根据其描述可鉴定为粪类圆线虫杆状蚴。

　　图28粪类圆线虫形态

　　A:未染色标本10×40b:暗视野观察，c:HE染色观察10×40

　　3.2组织内的虫体检查肠粘膜组织切片检查，可见粘膜下虫体存在[6]。

　　图29组织切片标本：粪类圆线虫雌成虫寄生人体肠道，箭头所指为3条虫体[6]。

　　图30组织切片标本，系遭到粪类圆线虫破坏人肠道，男性患者死于肠穿孔[6]。

　　解：方框标识为细胞侵润和破坏的细部，D为大小不一分散在肠腔和粘膜内的杆状蚴。

　　图31上图放大图像，大箭头所指为成熟的虫体，椭圆形态的为虫卵，含待孵化的幼虫。左侧小箭头所指为隐藏的虫体[6]。

4.微生物培养基进行粪类圆线虫分离培养与鉴别

　　4.1琼脂培养基培养法可选用微生物学的大豆汤琼脂、普通琼脂、血液琼脂等培养基，进行粪类圆线虫培养与鉴别。方法:将1~2g的粪便(咳痰、分泌物、灌洗液少量)，放在培养基上，放置28~30℃进行培养。从粪便生长的菌落痕迹，可以观察是否有幼虫生长。图一般细菌培养，在细菌培养物接种使，必须先进行标本培养的划线，划线的菌落是按照划线的轨迹条纹，菌落有规律的发育生长，而在有粪类圆线虫幼虫生长时，培养基的菌落是以“不规则轨迹生长，可籍此鉴别有无粪类圆线虫幼虫[11]。

　　图31细菌培养皿，观察菌落不规则发育生长[11]。

　　图32显微镜低倍下在普通琼脂培养基上，从粪便周围，可以看到培养的粪类圆线虫运动轨迹，根据轨迹顶端进行查找虫体[11]。

　　图33显微镜低倍下，在琼脂培养基上，可以看到幼虫游走的痕迹，根据运动轨迹，可以确定粪类圆线虫幼虫阳性。如果阴性则没有“轨迹”。

　　4.3注意事项与鉴定要点①在观察和鉴定操作过程，一定要注意，可能有丝状蚴出现，具有传染性，必须戴防护手套;②防止幼虫游出，造成实验室感染，可以在琼脂培养基的平面最外面的边缘部分，加上一圈50%的甘油水溶液，因为甘油可以使幼虫死亡。更便于观察鉴定(活动时鉴定困难);③肉眼观察培养基有没有不规则的发育菌落;④如果肉眼观察怀疑时，可放低倍显微镜下，从粪便周围观察有没有幼虫游动的轨迹;⑤沿着轨迹观察到盲端，可以观察到幼虫有无[11]。

　　4.4容易发生的问题①注意细菌培养基，容易污染，特别是咳痰等呼吸道分泌物，怀疑是粪类圆线虫的感染检测，观察时注意，可能有其他的昆虫类污染，必须区分;②如果污染蝇蛆的时候，其爬行的菌落轨迹比较粗大，呈履带样菌落形态可以鉴别;③仍然可能有自由生活的阿米巴污染(非病源性)的游动痕迹，其比粪类圆线虫的轨迹细，可以看到在菌落上有凸起;④可以看到类芽孢杆菌属中，环境与昆虫生息的革兰阳性菌，其与粪类圆线虫幼虫轨迹的菌落不同[11]。因为，粪类圆线虫，经皮肤感染或是自身感染的幼虫，从血行移行右心，经过肺进入消化道。所以在咳痰中或是肺的灌洗液标本中检出幼虫时，都说明粪类圆线虫已经发展的有重症化趋势。如白血病、免疫功能低下、HIV和糖尿病的患者检出危险率高。在这类患者当中，幼虫进入其他内脏，由于携带肠道内的常住菌，可以诱发脑膜炎合并形成败血症。另外，进入流行区旅行免疫低下者和赤足旅行者，由于原来的健康(免疫)基础，更容易引起粪类圆线虫感染性幼虫感染。这一类患者群，可引起肠道疾病和粪类圆线虫感染，应高度重视[17]。提高检测方法和正确掌握形态学鉴定以及对该病的知识的提高，可能世界的粪类圆线虫发病率不是目前状况，多数患者都有不明显症状和有过隐性感染的经历过程中，没有引起足够重视，耽误了治疗。为此，当宿主免疫低下时，出现了粪类圆线虫感染的症状。尤其是现在世界性免疫低下的患者增加的情况[18]，应将粪类圆线虫检查列入日常检查，琼脂培养基不失是操作简单、鉴定容易、检出率高的检测方法[11]。

　　赤尾信明指出[5]：由于粪类圆线虫具有自身感染的特点，杆状蚴不需要排出体外，就可以发育成为具有感染性的丝状蚴，便可以侵入肠粘膜进入体内，形成肠道的反复循环，并发育为成虫。为此，一次感染后就可以引发长期、持续性感染。AIDS和成人T细胞白血病等免疫功能低下则引起感染症。在营养不良、服用免疫抑制剂、长期使用激素者和高龄者等人，反复自身感染，丝状蚴就可以从肠道向全身各个脏器扩散，引起重度感染，形成了自身接种性粪类圆线虫病。伴随细菌的二度感染则发生败血症，乃至死亡。这一类患者，成虫可以在肺脏寄生，咳痰中可以检查到杆状蚴和丝状蚴的粪类圆线虫。除在粪便和咳痰中可能检出到杆状蚴和丝状蚴以外，进行内窥镜时，采取组织活检标本中，可以看到粪类圆线虫幼虫的断端。在内窥镜中粘膜的白斑部分[5]。

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