区方奇南宁市市售猫华支睾吸虫感染调查

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华支睾吸虫成虫主要是寄生在人和动物胆管内,可引起宿主肝胆损伤,导致胆管炎、胆结石、肝纤维化、肝硬化,甚至胆管癌和肝癌。我国是全球华支睾吸虫病危害最严重的国家,目前有感染者约万例。华支睾吸虫病主要在我国广东、广西、黑龙江和吉林等省(自治区)流行,其中广西壮族自治区华支睾吸虫感染度全国最高。华支睾吸虫病传染源除人外还有种类繁多的保虫宿主,猫、狗、猪、狐狸、獾等哺乳动物均是华支睾吸虫的常见保虫宿主。目前我国共发现华支睾吸虫保虫宿主33种,犬和猫被认为是其中最重要的两种。因为猫喜食生鱼,家养猫和野生猫都很容易接触到感染性鱼肉而被感染,形成持续性感染源,不断向环境中排放虫卵,造成中间宿主螺和鱼感染,增加人类感染华支睾吸虫的风险。本研究调查广西壮族自治区南宁市市售猫华支睾吸虫感染情况,为华支睾吸虫保虫宿主防控提供依据。1材料和方法1.1虫体收集和处理从年8月至年5月,从南宁市2个市场屠宰猫的摊点收集猫肝,剖开胆囊并冲洗,收集虫体。顺着胆管解剖肝脏,挤压后清洗,收集华支睾吸虫。收集的虫体用生理盐水洗涤2～3遍,在显微镜下进行初步形态学鉴定和分类,记录每个肝脏中虫体数量,统计肝脏虫体数量中位数。1.2分子生物学鉴定采用组织DNA提取试剂盒(Qiagen公司）提取不同形态虫体DNA。参照文献方法，应用吸虫内转录间隔区2(ITS2）基因保守引物(t-3S:5′-GGTACCGGTGGATCACTCGGCTCGTG-3′；t-A28:5′-GGGATCCTGGTTAGTTTCTTTTCCTCC-GC-3′）进行PCR扩增。扩增产物送往上海生工进行测序，获得的序列进行BLAST比对。2结果2.1猫感染情况共收集了个肝脏,其中有68个发现有华支睾吸虫感染,感染率为64.76%。单个肝脏虫体数量最多达条,1～50条有28个,50～条有21个,～条有15个,条有6个。单个肝脏虫体数量中位数为72条。2.2虫体形态学描述在肝脏中分离到3种不同大小的华支睾吸虫(图1)。镜下3种虫体体形均较狭长、背腹扁平,前端稍窄,后端钝圆,呈葵花籽状,口腹吸盘前后排列,消化道简单。生殖系统较发达,子宫弯曲盘绕。3种吸虫主要是大小和睾丸存在较大差异,1号小型虫体平均大小约为8.0mm×3.0mm,未见睾丸;2号大型虫体平均大小约为17.5mm×4.0mm,有一对睾丸,前后排列于虫体后1/3处,为成虫;3号中等虫体平均大小约为12.5mm×3.5mm,仅有1个睾丸,排列于虫体后1/3处,呈分枝状(图1)。图1猫肝脏中3种不同大小华支睾吸虫比较2.3分子生物学鉴定小型、中等和大型华支睾吸虫ITS2基因的PCR扩增均出现了长度约bp的目的片段,通过测序分别获得、bp和bp的基因片段(图2)。将测序获得的序列进行BLAST比对,结果显示3种不同大小形态的虫体均与华支睾吸虫(GenBank登录号:KJ.1)具有较高同源性,为96%。图2猫肝脏中3种不同大小华支睾吸虫ITS2基因扩增结果注：MDNA标志物；1小型虫体ITS2基因的PCR扩增产物；2中型虫体ITS2基因的PCR扩增产物；3大型虫体ITS2基因的PCR扩增产物；4空白对照3讨论广西气候温暖,降雨充沛,非常适合华支睾吸虫中间宿主鱼和螺繁殖。此外,广西食用生鱼的习惯,使广西人群具有较高的华支睾吸虫感染率,感染人数估计高达万人。鱼塘边建厕所和吃“鱼生”是华支睾吸虫病流行最重要的两个危险因素。近年来,各级疾控部门通过健康宣教等方式逐步增强了人们对华支睾吸虫病的了解,同时基本消除了鱼塘边建厕所这一陋习,降低了中间宿主感染。但是由于华支睾吸虫保虫宿主种类繁多,其排出的粪便接触水源也可造成中间宿主螺和鱼感染。特别是猫喜食鱼肉,很多被感染的野猫或是农家饲养的家猫都可自由外出活动,其排出含虫卵的粪便很容易污染水体,感染水中螺。尤其是在华支睾吸虫病流行区,人们有喜欢用生鱼或是鱼内脏喂猫,造成猫重复感染,使得猫具有很高感染率和感染度,可作为传染源不断向环境中排出虫卵。已有调查显示,犬在广西地区华支睾吸虫病传播中具有重要潜能。本次调查在南宁市2个猫屠宰点共收集了份猫肝脏样品。据了解,这些猫主要来自周边地区,很多为家养猫,也有一些野猫。这些猫的华支睾吸虫感染率高达64.76%,而且单个肝脏中虫体数量中位数高达72条,提示猫是广西华支睾吸虫病的重要传染源。既往研究发现,广东地区猫华支睾吸虫感染率高达69.9%。广东和广西是华支睾吸虫病高发区,而猫是当地华支睾吸虫病的重要传染源,在开展华支睾吸虫病综合防控过程中要加强对猫等保虫宿主的管理。猫肝脏内的华支睾吸虫大小存在差异早有报道,但是缺乏相关分子生物学鉴定。本研究应用分子生物学技术对猫肝脏内不同形态大小的虫体进行分析和鉴定,结果显示不同大小的虫体为华支睾吸虫不同生长发育阶段的虫体,但在扩增获得的ITS基因片段长度略有不同。主要原因可能与本实验是用PCR产物直接进行测序有关,96%的同源性很可能是测序的误差或是酶错配所致。本研究发现猫肝脏中华支睾吸虫虫体数量越多,虫体个体往往较小,推测可能与虫体营养吸收有关。虫体越多,营养吸收竞争越激烈,有的虫体得不到足够的营养从而导致生长发育缓慢。（文章来源：.3:31中国血吸虫病防治杂志区方奇等参考文献略)相关资料

解剖猫查看其肝脏胆管里寄生的肝吸虫